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彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker II可以直接觀察蛋白電泳及清晰判斷Western Blotting的轉(zhuǎn)膜效果。本產(chǎn)品由9種多肽和蛋白質(zhì)組成，分子量大小為 3 kD，4.2 kD，6.5 kD，10 kD（綠色），15 kD，20 kD，25 kD，30 kD，40 kD（紅色） (注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預(yù)染蛋白Marker標定過。)。

● 使用說明：

第一次收到該產(chǎn)品，常溫融化后，徹底混勻，離心快甩將溶液完全收集到管底。

一. 制膠：

I 配制分離膠

1．按照表一將不同體積的雙蒸水、40% PAA（19:1）、凝膠緩沖液和乙二醇加入到小燒杯中混合。

2．加入10%APS和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。

3．在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液，然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1 cm的無水乙醇，使凝膠表面保持平整。

4．靜置15-30分鐘，待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

表一（一塊1 mm mini膠用量）

	分離膠	濃縮膠
	18％T, 5%C /5 ml	5％T, 3.3%C/2 ml
40% PAA（19:1）	2.25 ml	/
40% PAA (29:1)	/	0.25 ml
4×凝膠緩沖液	1.25 ml	0.5 ml
乙二醇（電泳級）	1.5 ml	/
ddH₂O	/	1.25ml
10％APS	50 μl	20 μl
TEMED	5 μl	2 μl

II 配制濃縮膠

去除覆蓋在分離膠上的乙醇層，用濾紙將殘留乙醇吸去。

1．按照表一將不同體積的雙蒸水、40%PAA（29:1）和凝膠緩沖液加入到小燒杯中混合。

2．加入10%過硫酸銨和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。

3．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

4．靜置30-60分鐘裝待凝膠聚合

二. 電泳：

1. 取Marker樣品，充分混勻后備用。不要加熱處理。

2. 電泳前，將10×陽極緩沖液（Cat No：AB080）和10×陰極緩沖液（Cat No：CB010）用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。將電泳槽的外槽加入1×陽極緩沖液，內(nèi)槽加入1×陰極緩沖液，輕柔拔出梳子，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過2×Tricine上樣緩沖液[Cat No：TP050]處理）加入點樣孔，參考下表進行電泳，至每條帶都清晰可見時停止電泳。整個電泳過程大約需要2-3個小時。

表二 多肽電泳條件

恒電壓	150V
起始電流	60-75mA/板膠
結(jié)束電流	15-25mA/板膠
電泳時間	2.5-3小時

三. 染色

根據(jù)常規(guī)實驗步驟，用配方6和7（表三）進行染色和觀察。如果使用配方6進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的考馬斯亮藍蛋白膠快速染色液（Cat No：RTD6201），該產(chǎn)品除具有染色快，無毒，靈敏性高等特點外，還能對小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離，是常規(guī)染色液的理想替代品。

注：預(yù)染蛋白Marker由于嵌合了染料，在不同的凝膠系統(tǒng)中遷移率會有不同，因此只能用來粗略估計目的蛋白的大小。如要精確確定蛋白的大小，請在同一凝膠系統(tǒng)中用非預(yù)染蛋白Marker來標定預(yù)染蛋白Marker的分子量。

表三 小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳試劑配制

1. 40%PAA（29:1）（配制濃縮膠）

貨號： AC2914

丙稀酰胺 38.67g

甲叉雙丙稀酰胺 1.33g

用ddH₂O溶解后定容至100 ml，過濾后使用。

貯存：4℃

2. 40% PAA（19:1） （配制分離膠）

貨號：AC1914

丙稀酰胺 38 g

甲叉雙丙稀酰胺 2 g

用ddH₂O溶解后定容至100 ml，過濾后使用。

貯存：4℃

3. 4×凝膠緩沖液（配制凝膠用）

貨號：GB010

[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]

Tris堿 36.3 g；ddH₂O 80ml

0.4 g SDS或4 ml 10％ SDS

用HCl調(diào)pH值至8.45；用ddH₂O定容至100 ml

貯存：4℃

4. 10×陽極緩沖液（下槽緩沖液）

貨號：AB080

[2 M Tris pH8.9]

Tris堿 121.1g；ddH₂O 400ml；用HCl調(diào)pH值至8.9；用ddH₂O定容至500ml

貯存：4℃

注：使用前稀釋成1×陽極緩沖液使用。

5. 10×陰極緩沖液（上槽緩沖液）

貨號：CB010

[1 M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]

Tris堿 121.14g；Tricine 179.2g；SDS 10 g

用ddH₂O溶解，定容至1000 ml(不用調(diào)pH)。

貯存：4℃

注：使用前稀釋成1×陰極緩沖液使用

6. 染色液

貨號：RTD6203

冰醋酸 100 ml

考馬斯亮藍G-250 0.25 g

水 900 ml

7. 脫色液

貨號：RTD6204

冰醋酸 100 ml

水 900 ml

8. 2×Tricine蛋白樣品上樣緩沖液（10ml）

貨號：TP050

1ml1MTris-HCl pH6.8；2.4 ml 甘油；0.8 g SDS；0.31 g DTT（或者400 μl β-巰基乙醇）；2 mg 考馬斯亮藍G-250；用滅菌水定容至10ml

混勻分裝-20℃貯存?zhèn)溆?/span>

多肽電泳配套試劑

名稱	貨號	規(guī)格
超低分子量蛋白電泳試劑盒	RTD6120	10次
Tris-Tricine-SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒（含預(yù)染Marker）	RTD6121	10次
Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（多肽變性電泳）	RTD6122	25次
超低分子量蛋白Marker I（3.3-22 kD）（非預(yù)染）	RTD6101	10次（100 μl）
超低分子量蛋白Marker III（3.4-100 kD）（非預(yù)染）	RTD6125	10次（50 μl）
超低分子量蛋白Marker V（3.5-42 kD）（非預(yù)染）	RTD6113	20次（100 μl）
彩虹預(yù)染超低分子量蛋白Marker（1.2-45 kD）	RTD6110	10次（50 μl）
彩虹預(yù)染超低分子量蛋白Marker II（3-40 kD）	RTD6145-01	10次（50 μl）
雙色預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker（1.5-42 kD）	RTD6148	10次（50 μl）
40% PAA（19:1）	AC1914-01	100ml
40% PAA（29:1）	AC2914-01	100ml
49.5％ T 3％C PAA溶液	PS080-01	100ml
49.5％ T 6％C PAA溶液	PI080-01	100ml
4×多肽電泳凝膠緩沖液	GB010-100ml	100ml
2×Tricine 上樣緩沖液（變性，還原）	TP050	10×1ml
2×Tricine 上樣緩沖液（變性，還原，含溴酚藍）	TP080	10×1ml
FastBlue蛋白染色液	RTD6202-02	500ml
乙二醇（電泳級）	EA0582-02	100 ml
50%甘油（多肽電泳用）	GA1010-50ml	50 ml
10×Tris-Tricine-SDS緩沖液(變性電泳，粉末型)	CB010P	500 ml
10×陽極緩沖液（多肽電泳用）	AB080	250 ml
10×陰極緩沖液（多肽電泳用）	CB010	100 ml

使用RTD6145 彩虹預(yù)染超低分子量Marker II（3-40 kD）產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：

1. [2022 IF=13.6] Inactivation mechanism of cold plasma combined with 222 nm ultraviolet for spike protein and its application in disinfecting of SARS-CoV-2

Author: Xiaowei Sheng, Jin Wang, Luling Zhao, Wenjing Yan, Jing Qian, Zhaobin Wang, Jianhao Zhang, Vijaya Raghavan

Marker: RTD6145 彩虹預(yù)染超低分子量Marker II（3-40kD）

Journal: Journal of Hazardous Materials 465 (2024) 133458

Institution: Nanjing Agricultural University

Paper link： https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2024.133458

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